PRÁCTICA DE LA AMILASA.

INTRODUCCIÓN TEÓRICA.
La amilasa es una encima que tiene la función de catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples. Se produce principalmente en las glándulas salivales y en el páncreas, y tiene actividad enzimática. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre. El pH óptimo de la amilasa salival es de 6.9.

La amilasa sirve en el diagnóstico de enfermedades al determinar sus niveles en plasma para saber si se puede producir una pancreatitis. Sus niveles pueden estar elevados por un daño a las células productoras de la enzima en el páncreas, o bien, por una deficiencia renal  o también por paperas.

Las enzimas amilasas son empleadas en la fabricación de pan para romper glúcidos complejos como el almidón, presente en la harina. La levadura puede entonces alimentarse de esos azúcares simples y convertirlos en productos de fermentación alcohólica, entre ellos el gas carbónico.

MATERIAL NECESARIO.

-Gradilla.

-Tubos de ensayo.

-Pipeta de 5 y 10ml.

-Propipeta.

-Pipeta Pasteur.

-Vaso de precipitado.

-Vidrio reloj.

-Cucharilla.

-Sal, limón, bicarbonato.

-Bolsa de hielo.

-Lugol.

-Fehling A y B.

-Almidón soluble.

-Agua y saliva.

HIPÓTESIS INICIAL.

La amilasa de la saliva se desnaturalizará y observaremos los distintos cambios que obtendrá cada tubo con los productos a lo largo de la práctica.

OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS.

-Conseguir desnaturalizar la amilasa de la saliva.

-Aprender la utilización de Fehling A y B, y Lugol.

-Adquerer práctica y soltura en el laboratorio.

MÉTODO DE EXPERIMENTACIÓN.

1.-Se vierte saliva junto con agua, y se pipetea esta mezcla en todos los tubos excepto el 6 y 6', a los que se añadirán 0,5ml.

2.-Antes de todo, 0,5 gr de almidón se mezclan con 50ml de agua (disolución de almidón al 10%).

3.-Respecto los tubos 3 y 3', se pipetea 1ml de bicarbonato sódico en agua al 30%, y 1ml de ácido cítrico.

4.-Respecto los tubos 4 y 4', se les añade 0,5 gr de NaCl.

5.-Respecto a los tubos 5 y 5', se someten a cambios de temperatura, es decir, se combina una bolsa con hielo durante unos 2-3 minutos, a un baño María a 37º durante 1 minuto.

6.-Respecto a los tubos 6 y 6', se les añade 0,5 ml de ácido acético.

7.-Se vierte 1mL de almidón preparado anteriormente en cada uno de los tubos, calentando a 37ºC el 1, 2 y 2’durante 3 minutos.

8.-En los tubos 1,2,3,4,5,6 se les añade 1ml de Lugol y a los tubos 1',2',3',4',5',6' se les añade 0,5 ml de Fehling A y 0,5ml de Fehling B.

9.-Finalmente se calientan los tubos a baño María durante 1 minuto, y se observan los resultados.

 OBTENCIÓN DE RESULTADOS.

 tubo 1 (reacción Lugol-Almidón)

 tubos 2- 6 (reacción Lugol)

 estado inicial tubos 2'-6' (reactivo FEhling A y B)

 estado final tubos 2'-6' (después del baño María)

ANÁLISIS DE RESULTADOS.

-El tubo 1, tras 1ml de almidón en agua y 1ml de Lugol, apareció de color morado.

-El tubo 2,tras saliva disuelta en agua, almidón en agua y 1ml de Lugol, apareció de color marrón.

-El tubo 2', tras saliva disuelta en agua, almidón en agua y 0,5 de Fehling A y 0,5 de Fehling B, apareció de color azul verdoso.

-El tubo 3, tras saliva disuelta en agua, almidón en agua 0,5 de ácido cítrico, 0,5 ml de NaCO3 en agua y 1ml de Lugol, apareció de color marrón oscuro.

-El tubo 3', tras saliva disuelta en agua, almidón en agua 1 de ácido cítrico, 1 ml de NaCO3 en agua y 0,5 de Fehling A y  0,5 de Fehling B, apareció de color amarillo.

-El tubo 4, tras saliva disuelta en agua, almidón en agua y 0,5 de NaCl y 1ml de lugol, apareció de color marrón transparente.

-El tubo 4', tras saliva disuelta en agua, almidón en agua, 0,5 de NaCl y 0,5 de Fehling A y 0,5 de Fehling B, apareció de color azul verdoso.

-El tubo 5 (tras saliva disuelta en agua, almidón en agua), cambios bruscos de temperatura y 1ml de Lugol, apareció de color marrón transparente.

-El tubo 5',tras saliva disuelta en agua, almidón en agua , cambios de temperatura y 0,5 de Fehling a y B, apareció de color marrón translúcido.

-El tubo 6,tras saliva disuelta en agua, almidón en agua , 0,5 ml de ácido acético y 1ml de Lugol, apareció de color morado.

-El tubo 6', tras saliva disuelta en agua, almidón en agua, 0,5 de ácido acético y 0,5 de Fehling A y B, apareció de color azul.

CONCLUSIONES.

Tubo 1: El lugol reacciona con el almidón, al no estar mezclado con agua.

Tubo 2 y 2’: El almidón se combina con agua, la amilasa no ha sido desnaturalizada. El Fehling tiene reacciona y el lugol no.

Tubo 3 y 3’: El lugol con almidón reacciona  y Fehling con glucosa también ; parte del almidón ha sido hidrolizado y parte no.

Tubo 4 y 4’: La amilasa no ha sido desnaturalizada y ha degradado el almidón. Reacciona el Fehling y el lugol no.

Tubo 5 y 5’: La amilasa no ha sido desnaturalizada, y degradado el almidón. Reacciona el Fehling y el lugol no.

Tubo 6 y 6’: La amilasa sí ha sido desnaturalizada, y el almidón no se ha degradado. Reacciona el lugol pero el Fehling no.

ERRORES DE LA PRÁCTICA.

-Hubo falta de tiempo y no todos pudieron acabar las prácticas correctamente.

-En nuestro caso, alguien nos quitó algunos tubos y no pudimos acabar la práctica como es debido.

-En muchas muestras aparecieron hongos y se tuvieron que repetir.

CONFIRMACIÓN  O RECHAZO DE LA HIPÓTESIS.

La saliva fue desnaturalizada en algunos casos, con el efecto de bicarbonato y limón, por ejemplo, además hemos observado grandes cambios en algunas de las muestras, a pesar de que otras no han cambiado prácticamente.